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工作原理

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SYBR GreenI工作原理未结合的SYBR green I结合解离曲线识别不同的PCR产物在60 ℃~95 ℃之间的Ramp time设为19:59SYBR Green I的特点可以用于不同的模板使用方便,价格相对便宜灵敏度很高与非特异性产物结合解离曲线选择良好的引物和探针并优化反应条件TaqMan Probes荧光素淬灭剂与目标序列互补 Probes工作原理探针与目标序列配对时,发生FRET能量转移Taq游离的探针荧光基团延伸时,Taq酶水解探针,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离而发出荧光、形成荧光信号发出荧光另一波长的荧光随着扩增循环数的增加,TaqMan探针释放出来的荧光基团不断积累.因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系TaqMan探针应用基因检测,病毒定量,细胞因子基因定量,癌细胞基因微突变检测等其结果都具有高特异性与高敏感性但只适合于一个特定的目标TaqMan MGB探针非荧光淬灭基团MGB(Minor Groove Binder)将探针的Tm值提高10℃因此,MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短、既降低了合成成本,也使得探针设计的成功率大为提高.
TaqMan MGB探针对于富含AT的模板可以区分得更为理想.
分子信标(发夹型杂交探针)茎由互补配对的序列组成环与目标序列互补茎(5-7bp)环(15-30bp)Texas Red分子信标工作原理探针杂交到DNA模板DNA 模板茎环淬灭分子信标能特异性地检测感兴趣的目标DNA分子信标可用于单核苷酸多态性的检测特别适用于检测点突变只能用于一个特定的目标设计困难价格较高常用的热循环仪 PCRStratagene
32 Molecular Research
16 Smart iQBio-Rad
96, 384 Applied BiosystemsMax sample numberSample formatPCR systemCompany可以在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增一次可以测定96个样本,并且速度较快、一批样本的完成只需要2~3小时用于水解探针,双链DNA结合染料,分子信标的分析但是它不能实时对扩增结果进行分析,而只能在全部扩增结束后才进行数据分析

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